技術(shù)文章
Technical articles一、導(dǎo)論質(zhì)粒提取的原理:轉(zhuǎn)自復(fù)旦大學(xué)一位老師的帖子，后面是方法介紹堿裂解法從大腸桿菌制備質(zhì)粒，是從事分子生物學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室每天都要用的常規(guī)技術(shù)。可是我收研究生十幾年了，幾乎毫無例外的是我那些給人感覺什么都知道的學(xué)生卻對堿法質(zhì)粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因?yàn)椤斗肿涌寺 防锩嬷恢v實(shí)驗(yàn)操作步驟，而沒有對原理進(jìn)行詳細(xì)的論述。這是導(dǎo)致我的學(xué)生誤入歧途的主要原因。后來我發(fā)現(xiàn)其實(shí)是整個(gè)中國的相關(guān)領(lǐng)域的研究生水平都差不多，甚至有很多“老師”也是這個(gè)狀態(tài)。這就不得不讓人感到悲哀了...
FluorescentDye（熒光染料）Excitation（激發(fā)波長，nm）Emission（發(fā)射波長，nm）Cy2489506GFP（RedShifted）488507YO-PRO-1491509YOYO-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen?500503522OregonGreen?488496524Rlbo...
（一）原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點(diǎn)為PH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。在PH7.2～7.4的環(huán)境中，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是...
1975年，Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無限增殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)。這一技術(shù)上的突破不僅為醫(yī)學(xué)與生物學(xué)基礎(chǔ)研究開創(chuàng)了新紀(jì)元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。制備單克隆抗體包括動物免疫、細(xì)胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細(xì)胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產(chǎn)，要經(jīng)過幾個(gè)月的一系列實(shí)驗(yàn)步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實(shí)驗(yàn)方法。細(xì)胞融合前準(zhǔn)備細(xì)...
撰稿李恩善免疫血清的制備是一項(xiàng)常用的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。價(jià)、高特異性的免疫血清可作為免疫學(xué)診斷的試劑（如用于制備免疫標(biāo)記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價(jià)高低取決于實(shí)驗(yàn)動物的免疫反應(yīng)性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強(qiáng)的抗原刺激高應(yīng)答性的機(jī)體，?？色@得價(jià)的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時(shí)，則需同時(shí)加用佐劑以增強(qiáng)抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時(shí)間...
薄基底膜腎?、粜湍z原α鏈分布的免疫組化研究張承英朱世樂章友康鄭欣鄂潔侯平薄基底膜腎病（TBMN）是以持續(xù)性鏡下血尿?yàn)橹饕憩F(xiàn)的一種遺傳性腎病，腎小球基底膜（GBM）彌漫性變薄為該病惟一重要的病理學(xué)特征。既往關(guān)于Alport綜合征（Alportsyndrome,AS），另外一種以持續(xù)性鏡下血尿,GBM變薄增厚、撕裂、分層為特征的遺傳性腎病，Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究較多，眾多研究表明,AS患者腎小球基底膜Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈表達(dá)缺陷［1］,而關(guān)于薄基底膜腎?、粜湍z原α...
趙彩彥劉金星王淑琴甄真周俊英采用ABS-ELISA法（藥盒由比利時(shí)Innogentics公司提供）和雙抗體夾心ELISA法（藥盒由法國Immunotech公司或軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供）對46例肝炎肝硬化進(jìn)行了血清和腹水中IL-6、IL-2、TNF-α的測定。與正常對照組比較，肝炎肝硬化患者血清和腹水IL-6、TNF-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低。合并自發(fā)性腹膜炎（SBP）患者血清IL-6、TNF-α水平為（33.19±12.31）ng/L,（11.73&pl...
隨著分子生物學(xué)、免疫學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，運(yùn)用重組表達(dá)技術(shù)來生產(chǎn)預(yù)防和治療疾病的制品已成為近幾年研究的熱點(diǎn)。白細(xì)胞介素-2是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，它能夠有效地提高免疫功能，醫(yī)學(xué)上已用于預(yù)防和治療一些常規(guī)方法難以治療的疾病，如腫瘤等；在獸醫(yī)方面因其能提高疫苗的免疫效果，尤其是在基因工程亞單位苗的免疫效果而倍受重視，展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。一、白細(xì)胞介素-2的受體及其生物學(xué)功能：白細(xì)胞介素-2（IL-2）是一種zui早發(fā)現(xiàn)的具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子，在1979年第二屆淋...
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